Jump to content
  • Kaydol
Cenk Önsoy

Protein Konsantrasyonu Nasıl Belirlenir?

Önerilen İletiler

DENEYİN KONUSU : Protein Konsantrasyonun Belirlenmesi  

    MATERYALLER :

        1 – Bovine serum albumin= BSA

        2 – Bradford boyası

        3 – Distile su

        4 – Mikropipetler (10-100 μl , 100-1000 μl)

        5 – Spectrofotometre küveti , ependorf tüpler

        6 – Daha önce hazırladığımız Tampon B ve protein içeren solüsyonlar

    DENEYİN YAPILIŞI :

        1 - Öncelikle spektrofotometreyi sıfırlamak için gerekli olan kör küvetleri hazırlandı(asistanlar tarafından). İki ayrı küvete 500 μl BSA ile 500 μl Bradford koyarak karışmasından oluşturuldu.

        2 – Protein ölçümü için ilk önce konsantrasyonu bilinen bir proteniden (BSA) standart bir eğri hazırlamamız gerekiyor. Bunun için 1 mg/ml BSA’nın farklı konsantrasyonlarına Bradford boyası ekleyerek aşağıdaki tabloyu oluşturuyoruz.

Tüpler

1

2

3

4

5

6

7

8

BSA (μl)

10

20

50

100

150

200

300

400

Distile su (μl)

490

480

450

400

350

300

200

100

Bradford (μl)

500

500

500

500

500

500

500

500

Toplam(μl)

1000

1000

1000

1000

1000

1000

1000

1000

 

Gruplar

          1.grup

          2.grup*

          3.grup

          4.grup

                   

        3 – Daha önceki deneyde hazırlamış olduğumuz izole protein örneklerinin her birinden birer tane aşağıdaki miktarlarda ekleyerek absorbsiyon değerlerini öğrenmek için speckrofotometreye göndermeye hazır duruma geleceğiz.

 

Protein örneği

      10 μl

Distile su

    490 μl

Bradford

    500 μl

Toplam

  1000 μl

        4 – Örnekleri iyice karıştırdıktan sonra en az 5 dakika bekleyerek, 595 nm’de ki absobsiyon değerini ölçmek için spektrofotometre cihazının bulunduğu yere gidilir.

        5 – Aldığımız sonuçlarına göre doğrusal grafik hazırlama işlemine geçilir. Bu işlemde absise( x eksenine) standart protein çözeltilerinin konsantrasyon değerlerini, ordinatına (y eksenine) da absorbsiyon değerlerini(A.D) değerlerini girerek, standart bir eğri oluşturmaya çalışacağız.

        6 – Bu grafiğin hazırlanma sebebi bizim hazırlamış olduğumuz protein değerinin konsantrasyonunu bulmaktır. Bu işlem içinde hazırladığımız protein örneklerinin A.D değerlerini x eksenine dik olacak şekilde getirerek protein örneğimizin ne kadar miktarda olduğunu öğrenmek içindir.

    GÖZLEM ve SONUÇLAR :

    Gözlem:

Tüpler

1

2

3

4

5

6

7

8

BSA (μl)

10

20

50

100

150

200

300

400

Distile su (μl)

490

480

450

400

350

300

200

100

Bradford (μl)

500

500

500

500

500

500

500

500

Toplam(μl)

1000

1000

1000

1000

1000

1000

1000

1000

 

Gruplar

          1.grup

          2.grup*

          3.grup

          4.grup

 

Absorbsiyon değerleri(595 nm’de)

0.483

0.582

0.960

1.023

1.137

1.178

1.186

X

                           

        İlk 7 tüpte beklenmedik bir rakam ile karşılaşılmaz iken 8. ependorfda A.D değeri okunamamıştır.

Protein örneği

      10 μl

      10 μl

 Distile su

    490 μl

    490 μl

Bradford

    500 μl

    500 μl

Toplam

  1000 μl

  1000 μl

Absorbsiyon değerleri(595 nm)

  0.879

(1. ependorf)

  0.959

(2.ependorf)

      Yandaki tabloda görülen değerlerin ortalamasını alarak sonuca varacağız. Çünkü 2. grup olarak her iki protein örneğimizin de A:D’ sini almıştık (herhangi bir olumsuz sonuç için), ve aldığımız bu değerlerin birbirine yakın olmasından dolayı bu ikisinin ortalamasını alarak tablo oluşturma işlemine geçeceğiz.

         (1.ependorf A.D + 2. ependorf A.D) / 2 = ortalama A.D

       => (0.879+0.959) / 2 = 0.959 ≈ 0.960 eder.

 

    Sonuç:Farklı protein solusyonlarında ne kadar protein olduğunu hesaplama yöntemlerinden birisinin BSA kimyasalı ile belirlenmiş A.D değerlerin hesaplanıp grafik üzerinde gösterimi ile olabileceğini görmüş olduk. Yalnız grafik oluştururken BSA ile ölçülmüş A.D’ lerin değerlerinin birbirinden çok farklı olmamalarına dikkat edilmeli aksi takdirde A.D’ler grafiğe eklenirken bir eğri yerine bir aşağı bir yukarı giden eğriyi yakalamak mümkün olmaz. O yüzden eğrinin durumunu bozacak değerlerin eğriye eklenmeden hesaplamaları yapılarak grafik tamamlanmış olur

İletiyi paylaş


İletiye bağlantı
Misafir
Misafir olarak yorum yapıyorsun, buradan giriş yaparak yorum yapabilirsin.
Bu konuyu yanıtla

×   Yapıştırdığınız içerik biçimlendirme içeriyor.   Biçimlendirmeyi Temizle

  Only 75 emoji are allowed.

×   Adresiniz otomatik olarak yerleştirildi.   Display as a link instead

×   Önceki içeriğiniz geri yüklendi.   Editör içeriğini temizle

×   You cannot paste images directly. Upload or insert images from URL.


Hakkımızda

Biyoloji Günlüğü ülkemizdeki biyoloji öğrencileri, mezunları ve çalışanları adına kar gütmeyen bir proje olarak 6 senedir faaliyetlerine yılmadan devam etmeye çalışan masum bir projedir. Lütfen art niyetinizi forumdan uzak tutunuz. Bize iletişim formu aracılığıyla ulaşabilirsiniz.

Dilerseniz biyolojigunlugu@gmail.com veya admin@biyolojigunlugu.com adresine mail de gönderebilirsiniz. Bizimle arşivinizi paylaşmak isterseniz wetransfer.com üzerinden biyolojigunlugu.com adresine dosya transferi olarak iletmeniz yeterlidir, sizin adınıza paylaşılacaktır.

×

Önemli Bilgilendirme

Kullanım Şartları, Gizlilik Politikası, Forum Kuralları sayfalarına göz atınız.