Annealing (kaynaşma) nedir?

Annealing (kaynaşma) nedir?

Kısaca: Isıtılan DNA’nın yavaşça soğutularak tekrar çift zincirli haline geri dönmesidir.

Polimeraz zincir reaksiyonu temel olarak 3 aşamada gerçekleşir ve annealing bunlardan biridir.Daha iyi anlaşılcağını düşündüğüm için bu 3 basamaktan da bahsedeyim.

Denatürasyon:İlk aşamada DNA molekülünün çift zincirli yapısı yüksek ısı yardımıyla birbirinden ayrılır(denatürasyon) .Çoğunlukla 94°C- 97°C arasında 15-60 sn süresince uygulanır.

Annealing(Bağlanma):Denatürasyonu takiben daha düşük ısılarda oligonükleotid primerler, ayrılmış olan tek zincirli DNA üzerinde kendi eşlenikleri olan bölgelere bağlanırlar.Bu olay çoğunlukla 47°C- 60°C arasında 30-60 sn ‘de gerçekleşir.(G/C oranı yüksek olan bölgelerde bağlanma ısısı 68°C’ye kadar arttırılabilir)

Elongasyon(uzama):Son aşamada ısı 72°C’ye kadar arttırılarak DNA polimeraz enziminin tamamlayıcı DNA zincirini uzatması sağlanır. Elongasyon basamağının süresi kullanılan polimerazın cinsine ve amplifiye edilecek DNA‘nın uzunluğuna göre 30sn ile 3 dakika arasında değişir.

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *